Óleo essencial puro de Saposhnikovia divaricata para fabricação de velas e sabonetes, disponível para venda por atacado em difusores de varetas.

Descrição resumida:

 

2.1. Preparação do SDE

Os rizomas de SD foram adquiridos como erva seca da Hanherb Co. (Guri, Coreia). A identificação taxonômica do material vegetal foi realizada pela Dra. Go-Ya Choi, do Instituto Coreano de Medicina Oriental (KIOM). Uma amostra de referência (número 2014 SDE-6) foi depositada no Herbário Coreano de Recursos Herbais Padrão. Os rizomas secos de SD (320 g) foram extraídos duas vezes com etanol a 70% (com refluxo de 2 h) e o extrato foi então concentrado sob pressão reduzida. A decocção foi filtrada, liofilizada e armazenada a 4 °C. O rendimento do extrato seco a partir da matéria-prima bruta foi de 48,13% (m/m).

 

2.2. Análise quantitativa por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC)

A análise cromatográfica foi realizada com um sistema HPLC (Waters Co., Milford, MA, EUA) e um detector de arranjo de fotodiodos. Para a análise de SDE por HPLC, o prim-OO padrão de -glucosilcimifugina foi adquirido do Instituto Coreano de Promoção da Indústria de Medicina Tradicional (Gyeongsan, Coreia), esec-O-glicosilhamaudol e 4′-O-β-D-glicosil-5-OO -metilvisaminol foi isolado em nosso laboratório e identificado por análises espectrais, principalmente por RMN e EM.

Amostras de SDE (0,1 mg) foram dissolvidas em etanol a 70% (10 mL). A separação cromatográfica foi realizada com uma coluna XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, EUA). A fase móvel consistiu em acetonitrila (A) e ácido acético a 0,1% em água (B) a uma vazão de 1,0 mL/min. Um programa de gradiente multietapas foi utilizado da seguinte forma: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) e 20–65% A (23–40 min). O comprimento de onda de detecção foi varrido de 210 a 400 nm e registrado em 254 nm. O volume de injeção foi de 10,0μL. Soluções padrão para a determinação de três cromonas foram preparadas a uma concentração final de 7,781 mg/mL (prim-O-glicosilcimifugina), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-glicosil-5-O-metilvisaminol), e 31,125 mg/mL (sec-O-glucosilhamaudol) em metanol e mantido a 4°C.

2.3. Avaliação da atividade anti-inflamatóriaIn vitro

2.3.1. Cultura de células e tratamento de amostras

As células RAW 264.7 foram obtidas da American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, EUA) e cultivadas em meio DMEM contendo 1% de antibióticos e 5,5% de FBS. As células foram incubadas em atmosfera umidificada com 5% de CO2 a 37°C. Para estimular as células, o meio foi substituído por meio DMEM fresco e lipopolissacarídeo (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, EUA) a 1μg/mL foi adicionado na presença ou ausência de SDE (200 ou 400μg/mL) por mais 24 horas.

2.3.2. Determinação de Óxido Nítrico (NO), Prostaglandina E2 (PGE2), Fator de Necrose Tumoral-α(TNF-α) e produção de interleucina-6 (IL-6)

As células foram tratadas com SDE e estimuladas com LPS por 24 h. A produção de NO foi analisada pela medição de nitrito usando o reagente de Griess, de acordo com um estudo anterior [12Secreção das citocinas inflamatórias PGE2, TNF-αA concentração de IL-6 foi determinada utilizando um kit ELISA (R&D Systems) de acordo com as instruções do fabricante. Os efeitos do SDE na produção de NO e citocinas foram determinados a 540 nm ou 450 nm utilizando um espectrofotômetro Wallac EnVision.™Leitor de microplacas (PerkinElmer).

2.4. Avaliação da atividade antiosteoartríticaIn vivo

2.4.1. Animais

Ratos machos Sprague-Dawley (7 semanas de idade) foram adquiridos da Samtako Inc. (Osan, Coreia) e mantidos em condições controladas com um ciclo claro/escuro de 12 horas.°C e% de umidade. Os ratos receberam dieta de laboratório e água.ad libitumTodos os procedimentos experimentais foram realizados em conformidade com as diretrizes dos Institutos Nacionais de Saúde (NIH) e aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Daejeon (Daejeon, República da Coreia).

2.4.2. Indução de OA com MIA em ratos

Os animais foram aleatorizados e designados aos grupos de tratamento antes do início do estudo (por grupo). Solução MIA (3 mg/50μL de solução salina a 0,9% foi injetado diretamente no espaço intra-articular do joelho direito sob anestesia induzida com uma mistura de cetamina e xilazina. Os ratos foram divididos aleatoriamente em quatro grupos: (1) grupo salina sem injeção de MIA, (2) grupo MIA com injeção de MIA, (3) grupo tratado com SDE (200 mg/kg) com injeção de MIA e (4) grupo tratado com indometacina (IM) (2 mg/kg) com injeção de MIA. Os ratos receberam SDE e IM por via oral 1 semana antes da injeção de MIA, durante 4 semanas. A dosagem de SDE e IM utilizada neste estudo foi baseada nas empregadas em estudos anteriores [10,13,14].

2.4.3. Medidas da distribuição de peso nas patas traseiras

Após a indução de OA, o equilíbrio original na capacidade de suporte de peso das patas traseiras foi interrompido. Um testador de incapacidade (Linton Instrumentation, Norfolk, Reino Unido) foi usado para avaliar as alterações na tolerância ao suporte de peso. Os ratos foram cuidadosamente colocados na câmara de medição. A força de suporte de peso exercida pelo membro posterior foi calculada como a média durante um período de 3 segundos. A proporção de distribuição de peso foi calculada pela seguinte equação: [peso no membro posterior direito/(peso no membro posterior direito + peso no membro posterior esquerdo)] × 100 [15].

2.4.4. Medições dos níveis de citocinas séricas

As amostras de sangue foram centrifugadas a 1.500 g por 10 minutos a 4°C; em seguida, o soro foi coletado e armazenado a −70°C até o uso. Os níveis de IL-1β, IL-6, TNF-αOs níveis de PGE2 no soro foram medidos utilizando kits ELISA da R&D Systems (Minneapolis, MN, EUA), de acordo com as instruções do fabricante.

2.4.5. Análise de RT-PCR quantitativa em tempo real

O RNA total foi extraído do tecido da articulação do joelho utilizando o reagente TRI® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA), retrotranscrito em cDNA e amplificado por PCR utilizando um kit ™ One Step RT PCR com SYBR Green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, EUA). A PCR quantitativa em tempo real foi realizada utilizando o sistema Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, EUA). As sequências dos primers e da sonda estão apresentadas na Tabela.1Alíquotas de cDNA da amostra e uma quantidade igual de cDNA de GAPDH foram amplificadas com a mistura mestra TaqMan® Universal PCR contendo DNA polimerase, de acordo com as instruções do fabricante (Applied Biosystems, Foster, CA, EUA). As condições de PCR foram 2 min a 50 °C, 10 min a 94 °C, 15 s a 95 °C e 1 min a 60 °C, durante 40 ciclos. A concentração do gene alvo foi determinada utilizando o método de Ct comparativo (número de ciclo limite no ponto de cruzamento entre a curva de amplificação e o limiar), de acordo com as instruções do fabricante.

Preço FOB:US$ 0,50 - 9.999 / peça

Quantidade mínima de encomenda:100 peças

Capacidade de fornecimento:10.000 peças por mês