Óleo puro de Saposhnikovia divaricata para fabricação de velas e sabonetes difusor de óleo essencial novo para difusores de queimador de palheta

breve descrição:

 

2.1. Preparação de SDE

Os rizomas de SD foram adquiridos como erva seca da Hanherb Co. (Guri, Coréia). Os materiais vegetais foram confirmados taxonomicamente pelo Dr. Go-Ya Choi do Instituto Coreano de Medicina Oriental (KIOM). Um espécime voucher (número 2014 SDE-6) foi depositado no Herbário Coreano de Recursos Herbal Padrão. Rizomas secos de SD (320 g) foram extraídos duas vezes com etanol 70% (com refluxo de 2 horas) e o extrato foi então concentrado sob pressão reduzida. A decocção foi filtrada, liofilizada e armazenada a 4°C. O rendimento do extrato seco a partir de materiais de partida brutos foi de 48,13% (p/p).

 

2.2. Análise quantitativa por cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC)

A análise cromatográfica foi realizada com um sistema HPLC (Waters Co., Milford, MA, EUA) e um detector de arranjo de fotodiodos. Para a análise HPLC de SDE, o primárioOO padrão -glicosilcimifugina foi adquirido do Instituto de Promoção da Indústria de Medicina Tradicional da Coreia (Gyeongsan, Coreia), esec-O-glucosylhamaudol e 4′-O-β-D-glucosil-5-O-metilvisaminol foram isolados em nosso laboratório e identificados por análises espectrais, principalmente por RMN e MS.

Amostras de SDE (0,1 mg) foram dissolvidas em etanol a 70% (10 mL). A separação cromatográfica foi realizada com coluna XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, EUA). A fase móvel consistia de acetonitrila (A) e ácido acético 0,1% em água (B) a uma vazão de 1,0 mL/min. Um programa de gradiente de múltiplas etapas foi usado como segue: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) e 20–65% A (23–40 min). ). O comprimento de onda de detecção foi varrido em 210–400 nm e registrado em 254 nm. O volume de injeção foi de 10,0μL. Foram preparadas soluções padrão para determinação de três cromonas na concentração final de 7,781 mg/mL (prim-O-glicosilcimifugina), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-glucosil-5-O-metilvisaminol) e 31,125 mg/mL (sec-O-glucosylhamaudol) em metanol e mantido a 4°C.

2.3. Avaliação da atividade antiinflamatóriaIn vitro

2.3.1. Cultura Celular e Tratamento de Amostras

Células RAW 264.7 foram obtidas da American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, EUA) e cultivadas em meio DMEM contendo 1% de antibióticos e 5,5% de FBS. As células foram incubadas numa atmosfera humidificada de 5% de CO2 a 37°C. Para estimular as células, o meio foi substituído por meio DMEM fresco e lipopolissacarídeo (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, EUA) a 1μg/mL foi adicionado na presença ou ausência de SDE (200 ou 400μg/mL) por mais 24 horas.

2.3.2. Determinação de Óxido Nítrico (NO), Prostaglandina E2 (PGE2), Fator de Necrose Tumoral-α(TNF-α) e produção de interleucina-6 (IL-6)

As células foram tratadas com SDE e estimuladas com LPS por 24 horas. A produção de NO foi analisada medindo nitrito usando o reagente de Griess de acordo com um estudo anterior [12]. Secreção das citocinas inflamatórias PGE2, TNF-α, e a IL-6 foi determinada usando um kit ELISA (sistemas R&D) de acordo com as instruções do fabricante. Os efeitos do SDE na produção de NO e citocinas foram determinados em 540 nm ou 450 nm usando um Wallac EnVision™leitor de microplacas (PerkinElmer).

2.4. Avaliação da atividade antiosteoartriteIn Vivo

2.4.1. Animais

Ratos Sprague-Dawley machos (7 semanas de idade) foram adquiridos da Samtako Inc. (Osan, Coréia) e alojados sob condições controladas com um ciclo claro/escuro de 12 horas em°C e% de umidade. Os ratos receberam dieta de laboratório e águaad libitum. Todos os procedimentos experimentais foram realizados em conformidade com as diretrizes do National Institutes of Health (NIH) e aprovados pelo Animal Care and Use Committee da universidade de Daejeon (Daejeon, república da Coreia).

2.4.2. Indução de OA com MIA em Ratos

Os animais foram randomizados e distribuídos em grupos de tratamento antes do início do estudo (por grupo). Solução MIA (3 mg/50μL de solução salina 0,9%) foi injetado diretamente no espaço intra-articular do joelho direito sob anestesia induzida com mistura de cetamina e xilazina. Os ratos foram divididos aleatoriamente em quatro grupos: (1) o grupo de solução salina sem injeção de MIA, (2) o grupo de MIA com injeção de MIA, (3) o grupo tratado com SDE (200 mg/kg) com injeção de MIA e (4). ) o grupo tratado com indometacina (IM-) (2 mg/kg) com injeção de MIA. Os ratos foram administrados oralmente com SDE e IM 1 semana antes da injeção de MIA durante 4 semanas. A dosagem de SDE e IM utilizada neste estudo foi baseada naquelas empregadas em estudos anteriores [10,13,14].

2.4.3. Medições da distribuição de suporte de peso da pata traseira

Após a indução da OA, o equilíbrio original na capacidade de suporte de peso das patas traseiras foi perturbado. Um testador de incapacitância (instrumentação Linton, Norfolk, Reino Unido) foi utilizado para avaliar mudanças na tolerância de suporte de peso. Os ratos foram cuidadosamente colocados na câmara de medição. A força de suporte de peso exercida pelo membro posterior foi calculada em média durante um período de 3 s. A razão de distribuição de peso foi calculada pela seguinte equação: [peso no membro posterior direito/(peso no membro posterior direito + peso no membro posterior esquerdo)] × 100 [15].

2.4.4. Medições dos níveis séricos de citocinas

As amostras de sangue foram centrifugadas a 1.500 g por 10 min a 4°C; em seguida, o soro foi coletado e armazenado a -70°C até o uso. Os níveis de IL-1β, IL-6, TNF-αe PGE2 no soro foram medidos utilizando kits ELISA da R&D Systems (Minneapolis, MN, EUA) de acordo com as instruções do fabricante.

2.4.5. Análise quantitativa de RT-PCR em tempo real

O RNA total foi extraído do tecido articular do joelho usando o reagente TRI® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA), transcrito reversamente em cDNA e amplificado por PCR usando um kit TM One Step RT PCR com SYBR green (Applied Biosystems , Grand Island, NY, EUA). A PCR quantitativa em tempo real foi realizada utilizando o sistema Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, EUA). As sequências de primers e a sequência de sonda são mostradas na Tabela1. Alíquotas de cDNAs de amostra e uma quantidade igual de cDNA de GAPDH foram amplificadas com a mistura principal de PCR TaqMan® Universal contendo DNA polimerase de acordo com as instruções do fabricante (Applied Biosystems, Foster, CA, EUA). As condições de PCR foram 2 min a 50°C, 10 min a 94°C, 15 s a 95°C e 1 min a 60°C durante 40 ciclos. A concentração do gene alvo foi determinada utilizando o método comparativo Ct (número do ciclo limite no ponto cruzado entre o gráfico de amplificação e o limiar), de acordo com as instruções do fabricante.

Preço FOB:US$ 0,5 - 9.999/peça

Quantidade mínima do pedido:100 peças/peças

Capacidade de fornecimento:10.000 peças/peças por mês