A osteoartrite (OA) é uma das doenças degenerativas crônicas das articulações ósseas que afeta a população idosa com mais de 65 anos [
1]. Geralmente, os pacientes com OA são diagnosticados com cartilagem danificada, membrana sinovial inflamada e condrócitos erodidos, que desencadeiam dor e sofrimento físico [
2]. A dor artrítica é causada predominantemente pela degeneração da cartilagem nas articulações por inflamação e, quando a cartilagem é seriamente danificada, os ossos podem colidir uns com os outros, causando dor insuportável e sofrimento físico [
3]. O envolvimento de mediadores inflamatórios com sintomas como dor, inchaço e rigidez articular está bem documentado. Em pacientes com OA, citocinas inflamatórias, que causam a erosão da cartilagem e do osso subcondral, são encontradas no líquido sinovial [
4]. Duas das principais queixas que os pacientes com OA geralmente apresentam são dor e inflamação sinovial. Portanto, os principais objetivos das terapias atuais para OA são reduzir a dor e a inflamação. [
5]. Embora os tratamentos disponíveis para OA, incluindo medicamentos não esteroidais e esteroidais, tenham eficácia comprovada no alívio da dor e da inflamação, o uso prolongado desses medicamentos tem consequências graves para a saúde, como disfunções cardiovasculares, gastrointestinais e renais [
6]. Assim, um medicamento mais eficaz e com menos efeitos colaterais precisa ser desenvolvido para o tratamento da osteoartrite.
Os produtos naturais para a saúde estão se tornando cada vez mais populares por serem seguros e facilmente disponíveis [
7]. Os medicamentos tradicionais coreanos têm eficácia comprovada contra diversas doenças inflamatórias, incluindo a artrite [
8]. Aucklandia lappa DC. é conhecida por suas propriedades medicinais, como melhorar a circulação do qi para aliviar a dor e acalmar o estômago, e tem sido usada tradicionalmente como um analgésico natural [
9]. Relatórios anteriores sugerem que A. lappa possui propriedades anti-inflamatórias [
10,
11], analgésico [
12], anticancerígeno [
13] e gastroprotetor [
14] efeitos. As diversas atividades biológicas de A. lappa são causadas por seus principais compostos ativos: costunolida, deidrocostus lactona, diidrocostunolida, costuslactona, α-costol, saussurea lactona e costuslactona [
15]. Estudos anteriores afirmam que o costunolida demonstrou propriedades anti-inflamatórias em lipopolissacarídeos (LPS), que induzem os macrófagos por meio da regulação da via NF-kB e da proteína de choque térmico [
16,
17]. No entanto, nenhum estudo investigou as atividades potenciais de A. lappa no tratamento da OA. A presente pesquisa investigou os efeitos terapêuticos de A. lappa contra a OA usando modelos de roedores induzidos por MIA (iodoacetato monossódico) e ácido acético.
O iodoacetato monossódico (MIA) é conhecido por ser usado para produzir muitos dos comportamentos de dor e das características fisiopatológicas da OA em animais [
18,
19,
20]. Quando injetado nas articulações do joelho, o MIA desorganiza o metabolismo dos condrócitos e induz inflamação e sintomas inflamatórios, como erosão da cartilagem e do osso subcondral, os sintomas cardinais da OA [
18]. A resposta de contorção induzida com ácido acético é amplamente considerada como a simulação de dor periférica em animais onde a dor inflamatória pode ser medida quantitativamente [
19]. A linhagem celular de macrófagos de camundongo, RAW264.7, é popularmente usada para estudar as respostas celulares à inflamação. Após ativação com LPS, os macrófagos RAW264 ativam vias inflamatórias e secretam diversos intermediários inflamatórios, como TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS e IL-6 [
20]. Este estudo avaliou os efeitos antinociceptivos e anti-inflamatórios de A. lappa contra OA em modelo animal MIA, modelo animal induzido por ácido acético e células RAW264.7 ativadas por LPS.
2. Materiais e Métodos
2.1. Material Vegetal
A raiz seca de A. lappa DC. utilizada no experimento foi adquirida da Epulip Pharmaceutical Co., Ltd. (Seul, Coreia). Foi identificada pelo Prof. Donghun Lee, do Departamento de Farmacologia Herbal, Col. de Medicina Coreana, Universidade Gachon, e o número do espécime comprovante foi depositado como 18060301.
2.2. Análise de HPLC do extrato de A. lappa
A. lappa foi extraído usando um aparelho de refluxo (água destilada, 3 h a 100 °C). A solução extraída foi filtrada e condensada usando um evaporador de baixa pressão. O extrato de A. lappa teve um rendimento de 44,69% após liofilização sob -80 °C. A análise cromatográfica de A. lappa foi conduzida com um HPLC conectado usando um sistema HPLC 1260 Infinity II (Agilent, Pal Alto, CA, EUA). Para separação cromática, a coluna EclipseXDB C18 (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) foi usada a 35 °C. Um total de 100 mg da amostra foi diluído em 10 mL de 50% de metanol e sonicado por 10 min. As amostras foram filtradas com um filtro de seringa (Waters Corp., Milford, MA, EUA) de 0,45 μm. A composição da fase móvel foi de 0,1% de ácido fosfórico (A) e acetonitrila (B), e a coluna foi eluída da seguinte forma: 0–60 min, 0%; 60–65 min, 100%; 65–67 min, 100%; 67–72 min, 0% de solvente B, com vazão de 1,0 mL/min. O efluente foi observado a 210 nm, utilizando um volume de injeção de 10 μL. A análise foi realizada em triplicata.
2.3. Alojamento e gestão de animais
Ratos machos Sprague–Dawley (SD) com 5 semanas de idade e camundongos machos ICR com 6 semanas de idade foram adquiridos da Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Coreia). Os animais foram mantidos em uma sala com temperatura constante (22 ± 2 °C) e umidade (55 ± 10%) e um ciclo claro/escuro de 12/12 h. Os animais foram familiarizados com a condição por mais de uma semana antes do início do experimento. Os animais receberam ração e água à vontade. As regras éticas atuais para cuidados e manuseio de animais na Universidade Gachon (GIACUC-R2019003) foram rigorosamente seguidas em todos os procedimentos experimentais em animais. O estudo foi projetado como um ensaio cego para o investigador e paralelo. Seguimos o método de eutanásia de acordo com as diretrizes do Comitê de Ética em Experimentação Animal.
2.4. Injeção e tratamento de MIA
Os ratos foram separados aleatoriamente em 4 grupos, a saber, sham, controle, indometacina e A. lappa. Sendo anestesiados com 2% de mistura de isoflurano O2, os ratos foram injetados usando 50 μL de MIA (40 mg/m; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) intra-articularmente nas articulações do joelho para levar à OA experimental. Os tratamentos foram conduzidos como abaixo: os grupos controle e sham foram mantidos apenas com dieta básica AIN-93G. Apenas, o grupo indometacina recebeu indometacina (3 mg/kg) incorporada à dieta AIN-93G e o grupo A. lappa 300 mg/kg foi designado para dieta AIN-93G suplementada com A. lappa (300 mg/kg). Os tratamentos foram continuados por 24 dias desde o dia da indução da OA na taxa de 15–17 g por 190–210 g de peso corporal diariamente.
2.5. Medição de suporte de peso
Após a indução da OA, a medição da capacidade de suporte de peso dos membros posteriores dos ratos foi realizada com o Incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, EUA), conforme programado. A distribuição de peso nos membros posteriores foi calculada: capacidade de suporte de peso (%)
