A osteoartrite (OA) é uma das doenças articulares ósseas degenerativas crônicas de longo prazo que afeta a população idosa com mais de 65 anos [
1]. Geralmente, os pacientes com OA são diagnosticados com cartilagem danificada, sinóvia inflamada e condrócitos erodidos, que provocam dor e sofrimento físico.
2]. A dor artrítica é predominantemente causada pela degeneração da cartilagem nas articulações por inflamação, e quando a cartilagem está gravemente danificada, os ossos podem colidir uns com os outros, causando dor insuportável e sofrimento físico.
3]. O envolvimento de mediadores inflamatórios com sintomas como dor, inchaço e rigidez articular está bem documentado. Em pacientes com OA, citocinas inflamatórias, que causam a erosão da cartilagem e do osso subcondral, são encontradas no líquido sinovial.
4]. Duas queixas principais que os pacientes com OA geralmente apresentam são dor e inflamação sinovial. Portanto, os objetivos principais das atuais terapias de OA são diminuir a dor e a inflamação. [
5]. Embora os tratamentos disponíveis para OA, incluindo medicamentos não esteróides e esteróides, tenham eficácia comprovada no alívio da dor e da inflamação, o uso a longo prazo destes medicamentos tem consequências graves para a saúde, tais como disfunções cardiovasculares, gastrointestinais e renais.
6]. Assim, um medicamento mais eficaz e com menos efeitos colaterais deve ser desenvolvido para o tratamento da osteoartrite.
Os produtos naturais para a saúde estão se tornando cada vez mais populares por serem seguros e facilmente disponíveis [
7]. Os medicamentos tradicionais coreanos têm eficácia comprovada contra várias doenças inflamatórias, incluindo artrite [
8]. Aucklandia lappa DC. é conhecido por suas propriedades medicinais, como melhorar a circulação do qi para aliviar a dor e acalmar o estômago, e tem sido usado tradicionalmente como analgésico natural [
9]. Relatórios anteriores sugerem que A. lappa possui antiinflamatório [
10,
11], analgésico [
12], anticâncer [
13] e gastroprotetor [
14] efeitos. As diversas atividades biológicas de A. lappa são causadas por seus principais compostos ativos: costunolida, desidrocostus lactona, diidrocostunolida, costuslactona, α-costol, saussurea lactona e costuslactona [
15]. Estudos anteriores afirmam que a costunolida apresentou propriedades antiinflamatórias no lipopolissacarídeo (LPS), que induziu os macrófagos através da regulação do NF-kB e da via da proteína de choque térmico [
16,
17]. No entanto, nenhum estudo investigou as atividades potenciais de A. lappa no tratamento da OA. A presente pesquisa investigou os efeitos terapêuticos de A. lappa contra OA usando MIA (iodoacetato monossódico) e modelos de roedores induzidos por ácido acético.
O iodoacetato monossódico (MIA) é famoso por produzir muitos dos comportamentos de dor e as características fisiopatológicas da OA em animais.
18,
19,
20]. Quando injetado nas articulações dos joelhos, o MIA desorganiza o metabolismo dos condrócitos e induz inflamação e sintomas inflamatórios, como erosão da cartilagem e do osso subcondral, os sintomas cardinais da OA.
18]. A resposta de contorção induzida com ácido acético é amplamente considerada como a simulação da dor periférica em animais, onde a dor inflamatória pode ser medida quantitativamente.
19]. A linha celular de macrófagos de camundongos, RAW264.7, é popularmente usada para estudar as respostas celulares à inflamação. Após a ativação com LPS, os macrófagos RAW264 ativam vias inflamatórias e secretam vários intermediários inflamatórios, como TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS e IL-6 [
20]. Este estudo avaliou os efeitos antinociceptivos e antiinflamatórios de A. lappa contra OA em modelo animal MIA, modelo animal induzido por ácido acético e células RAW264.7 ativadas por LPS.
2. Materiais e Métodos
2.1. Material Vegetal
A raiz seca de A. lappa DC. usado no experimento foi adquirido da Epulip Pharmaceutical Co., Ltd., (Seul, Coréia). Foi identificado pelo Prof. Donghun Lee, Departamento de Farmacologia Herbal, Coronel de Medicina Coreana, Universidade de Gachon, e o número da amostra do voucher foi depositado como 18060301.
2.2. Análise HPLC do extrato de A. lappa
A. lappa foi extraída utilizando aparelho de refluxo (água destilada, 3 h a 100 °C). A solução extraída foi filtrada e condensada utilizando um evaporador de baixa pressão. O extrato de A. lappa teve rendimento de 44,69% após liofilização a -80 °C. A análise cromatográfica de A. lappa foi conduzida com um HPLC conectado usando um sistema HPLC 1260 InfinityⅡ (Agilent, Pal Alto, CA, EUA). Para separação cromática, utilizou-se coluna EclipseXDB C18 (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) a 35 °C. Um total de 100 mg da amostra foi diluído em 10 mL de metanol a 50% e sonicado por 10 min. As amostras foram filtradas com filtro de seringa (Waters Corp., Milford, MA, EUA) de 0,45 μm. A composição da fase móvel era 0,1% de ácido fosfórico (A) e acetonitrila (B) e a coluna foi eluída da seguinte forma: 0–60 min, 0%; 60–65 minutos, 100%; 65–67 minutos, 100%; 67–72 min, 0% de solvente B com vazão de 1,0 mL/min. O efluente foi observado a 210 nm utilizando um volume de injeção de 10 μL. A análise foi realizada em triplicata.
2.3. Alojamento e Manejo de Animais
Ratos machos Sprague-Dawley (SD) com 5 semanas de idade e ratos machos ICR com 6 semanas de idade foram adquiridos à Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Coreia). Os animais foram mantidos em sala com temperatura (22 ± 2 °C) e umidade (55 ± 10%) constantes e ciclo claro/escuro de 12/12 h. Os animais foram familiarizados com a condição por mais de uma semana antes do início do experimento. Os animais tiveram fornecimento ad libitum de ração e água. As regras éticas atuais para cuidados e manejo de animais na Universidade de Gachon (GIACUC-R2019003) foram rigorosamente seguidas em todos os procedimentos experimentais com animais. O estudo foi concebido como um ensaio paralelo e cego para o investigador. Seguimos o método de eutanásia de acordo com as orientações do Comitê de Ética Experimental Animal.
2.4. Injeção e tratamento de MIA
Os ratos foram separados aleatoriamente em 4 grupos, nomeadamente placebo, controle, indometacina e A. lappa. Sendo anestesiados com mistura de isofluorano O2 a 2%, os ratos foram injetados com 50 μL de MIA (40 mg/m2; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) intra-articularmente nas articulações do joelho para levar à OA experimental. Os tratamentos foram conduzidos conforme abaixo: os grupos controle e sham foram mantidos apenas com dieta básica AIN-93G. Apenas o grupo indometacina recebeu indometacina (3 mg/kg) incorporada na dieta AIN-93G e o grupo A. lappa 300 mg/kg foi designado para dieta AIN-93G suplementada com A. lappa (300 mg/kg). Os tratamentos foram continuados por 24 dias desde o dia da indução da OA, a uma taxa de 15 a 17 g por 190 a 210 g de peso corporal diariamente.
2.5. Medição de suporte de peso
Após a indução da OA, a medição da capacidade de sustentação de peso dos membros posteriores dos ratos foi realizada com o incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, EUA) conforme programado. A distribuição de peso nos membros posteriores foi calculada: capacidade de suporte de peso (%)
